1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

玉米粉飼料1(74%玉米,20%豆粕,8%麥皮),玉米粉飼料2(72%玉米,20%豆粕,8%麥皮,2%魚粉),雙乙酸鈉防霉劑;虎紅瓊脂培養(yǎng)基和馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)；萬香保和露保細(xì)鹽.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 飼料貯藏試驗(yàn)

在飼料1中加入不同重量的雙乙酸鈉防霉劑,使防霉劑在飼料中形成不同的濃度梯度,并分裝在密封的塑料袋里,每袋1 kg,置于29±1℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每個處理組做一個平行對照.每隔10 d取樣進(jìn)行一次霉菌菌數(shù)檢測.飼料中霉菌數(shù)量的檢測根據(jù)《飼料中霉菌的檢驗(yàn)方法》(GB/T13092-1991)[8]進(jìn)行.防霉劑的添加量如表1.

1.2.2 菌種分離

表1 飼料中防霉劑的添加量  

在霉菌數(shù)量測定中將得到的不同生長形態(tài)的霉菌菌落進(jìn)一步分離純化,根據(jù)文獻(xiàn)[9]初步鑒定出所分離的霉菌種類.

1.2.3 防霉劑最低抑菌濃度試驗(yàn)

菌液的制備:在無菌條件下用10 mL無菌水將PDA斜面培養(yǎng)基上的霉菌孢子洗脫,制成霉菌孢子懸液.

在含雙乙酸鈉防霉劑0.5,1.0,2.0,4.0,5.0 g/L的含30 mg/L硫酸鏈霉素的虎紅瓊脂平板上,分別劃線接種分離到的各霉菌菌種,28～30℃培養(yǎng)3 d后觀察霉菌的生長情況,不長霉菌菌落的平板的最低防霉劑濃度即為防霉劑對該霉菌的最低抑菌濃度.

1.2.4 防霉效果比較

將飼料2分裝在密封塑料袋里,分別加入不同濃度的雙乙酸鈉防霉劑和另兩種市售進(jìn)口飼料防霉劑萬香保、露保細(xì)鹽,每處理組做一個平行對照.在28～30℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每隔10 d檢測一次飼料中的霉菌數(shù),根據(jù)霉菌數(shù)量的變化比較各防霉劑的防霉效力.飼料所加的防霉劑及濃度如表2.

表2 飼料中加入不同防霉劑的量  

2 結(jié)果與討論

2.1 防霉劑不同濃度的抑菌效果

在飼料貯藏期間每隔10 d抽樣檢測一次飼料中的霉菌總數(shù),所得數(shù)據(jù)如表3.圖1為飼料貯藏期間霉菌數(shù)的變化曲線.可以看出,沒有加入防霉劑的飼料樣品對照組,其霉菌數(shù)目隨著貯藏時間的增加而上升,而加入防霉劑的處理組霉菌數(shù)量隨貯藏時間增加而逐漸下降.防霉劑濃度越高,霉菌數(shù)下降越快,說明雙乙酸鈉防霉劑對飼料中的霉菌有明顯的抑制和殺滅作用.1.0 g/kg的添加量就可以起到有效的防霉效果.

表3 飼料貯藏試驗(yàn)霉菌檢測數(shù) 

圖1 飼料貯藏期間霉菌數(shù)的變化

2.2 霉菌種類確定

從防霉實(shí)驗(yàn)中共分離出11株霉菌,通過鏡檢觀察它們的生長形態(tài),根據(jù)文獻(xiàn)[9]初步確定為以下霉菌種類:黑曲霉群,灰綠曲霉群,局限曲霉群,煙曲霉群,產(chǎn)紫青霉群,局限青霉群,斜臥青霉群,米根霉,匍匐散囊菌,白地霉(外生菌絲孢子型),土曲霉群.

2.3 防霉劑對不同霉菌的抑制效果

不同種類的霉菌對雙乙酸鈉防霉劑的敏感程度不同.雙乙酸鈉防霉劑對飼料中分離的霉菌的最低抑菌濃度測定結(jié)果如表4所示.

由表4可以看出,雙乙酸鈉防霉劑對灰綠曲霉群、煙曲霉群和白地霉(外生菌絲孢子型)的抑制作用較強(qiáng),1.0 g/L的濃度就可以完全抑制它們的生長;對其他種類的霉菌也有不同的抑制效果,最低抑菌濃度都在5.0 g/L以下.

虎紅培養(yǎng)基中加入30 g/L硫酸鏈霉素,可以抑制細(xì)菌的生長,有效排除細(xì)菌對實(shí)驗(yàn)的影響.

2.4 不同防霉劑防霉效果比較

雙乙酸鈉防霉劑與其它兩種市售進(jìn)口防霉劑通過飼料貯藏試驗(yàn)比較其防霉效果,在飼料貯藏期間每隔10 d檢測一次霉菌數(shù)目,所得數(shù)據(jù)如表5.

表4 雙乙酸鈉防霉劑對霉菌的最低抑菌濃度 

表5 3種防霉劑對比實(shí)驗(yàn)期間霉菌變化數(shù) 

從表5可以看出,3種飼料防霉劑對所試驗(yàn)的飼料均具有一定的防霉效果.雙乙酸鈉防霉劑防霉能力略強(qiáng)于萬香保,比露保細(xì)鹽強(qiáng)很多,在試驗(yàn)中抑菌效果是最好的,它的防霉作用快,能有效地減少和控制飼料中霉菌的生長.

防霉劑的防霉能力受到飼料成分、飼料的初始霉菌數(shù)及飼料的水分含量等因素的影響.本次對比貯藏試驗(yàn)所用飼料中含有2%魚粉,營養(yǎng)豐富,更適合霉菌的生長,因此在試驗(yàn)后期霉菌數(shù)目有所增加,在飼料貯藏中應(yīng)加以考慮.

3 結(jié)語

雙乙酸鈉是一種有效、快速的防霉劑,它的用量少,在飼料中加入1.0 g/kg就可以很好地抑制霉菌的生長發(fā)育,作用時間持久.

在防霉效果對比試驗(yàn)中可以看到,所試驗(yàn)的3種防霉劑都有一定的防霉能力,雙乙酸鈉防霉劑的防霉效果優(yōu)于其他兩種防霉劑.

不同霉菌對雙乙酸鈉防霉劑的敏感程度不同,防霉劑濃度達(dá)到5.0 g/L就基本能抑制常見的各種霉菌;防霉劑對灰綠曲霉、煙曲霉群和白地霉的作用較強(qiáng),1.0 g/L的濃度就能抑制它們的生長.

實(shí)驗(yàn)來源：《新型飼料防霉劑雙乙酸鈉防霉效果研究》黃通旺